實驗室微生物檢測無菌取樣的操作
更新時間：2022-08-30 瀏覽次數(shù)：1931
無菌取樣抽樣操作是整個實驗室微生物檢測流程的第一步，也是首先應(yīng)當(dāng)保證的重要環(huán)節(jié)。經(jīng)常會有這樣的情況：樣品檢測結(jié)果出現(xiàn)異常，我們排查了微生物檢測流程的方方面面都沒有出現(xiàn)偏差，結(jié)果是樣品在抽樣時已經(jīng)被污染。這樣的情況事實上并不鮮見，如何杜絕呢？還得從規(guī)范抽樣操作開始。由于不同類型的樣品應(yīng)采取不同的抽樣操作，為了使抽樣更加科學(xué)，下面針對不同樣品的抽樣操作進(jìn)行分類闡述。
液體樣品
一般情況下，液體樣品比較容易獲得代表性樣品。液態(tài)食品一般盛放在大罐中，取樣時可連續(xù)或間歇攪拌。對于較小的容器，可在取樣前將液體上下顛倒，使其*混勻。取得的樣品應(yīng)放在已滅菌的容器中送往實驗室，實驗室在取樣檢測之前應(yīng)當(dāng)把液體再*混勻一次。
固體樣品
根據(jù)所取樣品材料的不同，所使用的的工具也不同。固態(tài)樣品常用的取樣工具有解剖刀、勺子、軟木鉆、鋸、鉗子等，使用前均須滅菌。例如面粉或奶粉等已經(jīng)混勻的食品，其成分質(zhì)量均勻穩(wěn)定，可以抽取少量樣品檢測。但散裝樣品就必須從多個點取樣，且每個點都要單獨處理，在檢測前要*混勻。肉類、魚類或類似食品既要在表皮取樣，又要在深層取樣，深層取樣時要小心不要被表面污染。有些食品，如新鮮肉類或熟肉可用滅菌的解剖刀和鉗子取樣；冷凍食品在不解凍的狀態(tài)下用鋸、木鉆或電鉆，一般斜角鉆入來獲得深層樣品；粉末狀樣品取樣時，可用滅菌的取樣器斜角插入箱底，樣品填滿取樣器后提出箱外，再用滅菌勺從取樣器的上、中、下部位采樣。
水樣
取水樣時，最好選用帶有防塵磨口瓶塞的廣口瓶。對于氯氣處理過的水，取樣后在100mL水樣中加入0.1mL的2%的硫代*溶液。取樣時應(yīng)特別注意防止樣品的污染，樣品應(yīng)*地充滿取樣瓶。如果樣品時從水龍頭上取得，龍頭嘴的里外都應(yīng)擦干凈。打開水龍頭讓水流幾分鐘，關(guān)上水龍頭并用酒精燈灼燒，再次打開水龍頭讓水流1-2min后再接樣并裝滿取樣瓶。這樣的取樣方法能確保供供水系統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)分析的質(zhì)量，但如果微生物檢測的目的是用于追蹤微生物的污染源建議還應(yīng)在水龍頭滅菌前取樣會在龍頭的里外用棉拭子涂抹取樣，以檢測水龍頭自身污染的可能性。從水庫、池塘、井水、河流等取水樣時，用無菌的器械或工具拿取瓶子和打開瓶塞，在流動水中取樣品是瓶嘴應(yīng)直接對著水流。大多數(shù)國家的取樣程序中已明確規(guī)定了取樣所用器械，如果不具備適當(dāng)?shù)娜觾x器或臨時取樣工具，只能用手操作，但取樣時，應(yīng)特別小心，防止用手接觸水樣或取樣瓶內(nèi)部。
帶包裝食品
直接食用的小包裝食品盡可能取原包裝，直到檢測前不要開封防止污染；桶裝或者大容器包裝的液體或固體食品應(yīng)用無菌取樣器由幾個不同部位采取，一起放入一個滅菌容器內(nèi)，不要過度潮濕，以防食品中固有的細(xì)菌繁殖；對于桶裝或大容量包裝的冷凍食品，應(yīng)從幾個不同的部位用滅菌工具抽樣，使之有充分的代表性，將樣品送達(dá)實驗室前，要始終保持樣品處于冷凍狀態(tài)。若樣品一旦融化，不可使其再冷凍，保持冷卻即可。
表面采樣
通過惰性載體可以將表面樣品上的微生物轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)基中進(jìn)行微生物檢測，這陣惰性載體既不能引起微生物的死亡，也不應(yīng)使其增殖。這樣的載體包括清水、拭子等。要達(dá)到微生物既不死亡又不增殖很困難，因此取樣后應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測。表面取樣技術(shù)只能直接轉(zhuǎn)移菌體，不能做系列稀釋，只有在菌體數(shù)量較少的時候適用，其最大的優(yōu)點是取樣過程不破壞樣品。常用的表面取樣技術(shù)包括棉拭子、淋洗法、膠帶法等，這里以棉拭子法為例。微生物定性檢測時，只要涂抹全部需要檢測的表面即可。
而進(jìn)行的微生物定量檢測時，必須先用滅菌取樣框確定被測試的區(qū)域。用干燥的棉花纏在4cm長，直徑1-1.5mm的木棒或不銹鋼棒上做成棉拭子（為了方便也可使用一次性棉簽），放進(jìn)合金試管中，蓋上蓋子后滅菌。取樣時先將拭子在稀釋液中浸濕，然后再待測樣品表面緩慢旋轉(zhuǎn)拭子平行用力涂抹兩次。涂抹過程中應(yīng)保證拭子在取樣框內(nèi)。取樣后拭子重新裝回有10mL取樣溶液的試管中。
以上就是各種情況下無菌抽樣的操作要求。無菌抽樣的規(guī)范性是保證樣品微生物檢測準(zhǔn)確性的前提，因此我們在取樣時應(yīng)規(guī)范操作，確保從源頭杜絕污染。
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